O Ki é a constante de equilíbrio de dissociação do fármaco para o alvo.
No caso de receptores, o Ki é medido em experimento de binding, sendo, portanto o inverso da afinidade (quanto menor o valor de Ki, maior é a afinidade). Este valor é obtido em experimento de competição, onde a substância teste compete com uma substância de referência, marcada radioativamente, para a ocupação do receptor de interesse (https://www.sbfte.org.br/wp-content/uploads/2019/01/LIVRO_INTEIRO_SBFTE_3.pdf).
No caso de enzimas, o Ki é medido em ensaios de cinética enzimática quando se avalia a relação entre concentração do inibidor e inibição da atividade enzimática.
Nos dois casos, o valor do parâmetro obtido experimentalmente (CI50) é corrigido pela concentração de radioligante ou de substrato usado no teste para obter a constante Ki.